生物顯微鏡的使用小技巧之：覆蓋差

生物顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)也包含蓋玻片以內(nèi)。因?yàn)樯w玻片的薄厚不規(guī)范，光線從蓋玻片進(jìn)到家氣體造成映射后的激光光路發(fā)生了更改，進(jìn)而造成了象差，這就是覆蓋差。覆蓋差的造成危害了光學(xué)顯微鏡的成象品質(zhì)。國(guó)際性上要求，生物顯微鏡中蓋玻片的規(guī)范薄厚為0.17mm，容許范疇在0.16～0.20mm，在物鏡的生產(chǎn)制造上己將此薄厚范疇的象差測(cè)算以內(nèi)。物鏡機(jī)殼標(biāo)注刻的0.17，就是說(shuō)明該物鏡規(guī)定蓋玻片薄厚。

因?yàn)橹谱黾夹g(shù)性等緣故，生物顯微鏡中蓋玻片薄厚很有可能在0.16下列或0.18之上，因此便會(huì)產(chǎn)生覆蓋差。蓋玻片太厚，不應(yīng)該進(jìn)到物鏡的光線會(huì)進(jìn)到物鏡；蓋玻片過(guò)薄，則應(yīng)當(dāng)進(jìn)到物鏡的光線卻不可以進(jìn)到。

生物顯微鏡中變大倍數(shù)愈高，NA值愈大，覆蓋差愈顯著，尤以蓋玻片厚，覆蓋差更為嚴(yán)重。

在生物顯微鏡中清除覆蓋差理想化的方法，是用帶校準(zhǔn)環(huán)的物鏡來(lái)調(diào)整。這類物鏡常以40times干躁系物鏡。舊式光學(xué)顯微鏡可以用更改物鏡長(zhǎng)短來(lái)調(diào)整，蓋玻片過(guò)厚，能夠?qū)⑽镧R減少；過(guò)薄，可將物鏡相對(duì)變長(zhǎng)。但它是消沉的方式，因物鏡長(zhǎng)短更改，放大率也隨著更改，另外也危害成象品質(zhì)。因而不適合科學(xué)研究用光學(xué)顯微鏡。

油浸系物鏡不會(huì)有覆蓋差難題，它是因?yàn)橛秃蜕w玻片的折光率都在1.52上下，因此產(chǎn)生勻稱的光學(xué)系統(tǒng)。可是應(yīng)用油鏡時(shí)，生物顯微鏡中蓋玻片太厚，超出了工作中間距，則沒法變焦，乃至看不見圖像。

有的物境上標(biāo)著"-"標(biāo)記，一般為高倍物鏡（0.5times、0.75times、1times、2times），其NA值很低，不會(huì)受到蓋玻片的危害，這類物鏡能加也并不加蓋玻片；有的物鏡上標(biāo)著"0”標(biāo)記，為不可以加蓋玻片的物鏡，叫“無(wú)罩物鏡”。

在生物顯微鏡中物鏡數(shù)值孔徑越大，容許蓋玻片薄厚出現(xiàn)偏差的原因的范疇愈小，也表明越發(fā)低倍物鏡對(duì)蓋玻片薄厚的規(guī)定越嚴(yán)苛。