醫(yī)用倒置顯微鏡的使用

醫(yī)用倒置顯微鏡是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡，其由倒置顯微鏡和落射熒光裝置組成，具有在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內進行顯微觀察的特點，可實現(xiàn)活體細胞和組織、流質、沉淀物等差熒光觀察是科學研究工作中的理想儀器。所以，在醫(yī)學科研型研究生的實驗教學中，掌握醫(yī)用倒置顯微鏡的使用至關重要，只有正確的使用和妥善的管理醫(yī)用倒置顯微鏡，才能發(fā)揮它的功能和提高使用率，使之更好地為實驗教學和科學研究服務。

醫(yī)用倒置顯微鏡是用于生物科學研究領域的多功能顯微鏡，其結構復雜且價格昂貴，因此，要想醫(yī)學研究生正確掌握醫(yī)用倒置顯微鏡的操作使用規(guī)范，教師得首先在示范醫(yī)用倒置顯微鏡的實際操作之前，開設學習醫(yī)用倒置顯微鏡基本知識的課程，介紹醫(yī)用倒置顯微鏡的結構、原理、功能和基本使用方法，再在具體的使用操作中，針對不同的標本，示范不同的功能，由淺入深，逐漸使醫(yī)學研究生對醫(yī)用倒置顯微鏡的操作使用規(guī)范化。

1.明視野觀察的正確使用。醫(yī)用倒置顯微鏡的功能之一是明視野觀察，其基本原理是標本經光線照射后，各部分對光吸收的不同而在明亮的背景中實現(xiàn)成像，主要適用于經染色或本身具有顏色的細胞、組織切片等標本的觀察。

2.相差觀察的正確使用。醫(yī)用倒置顯微鏡的功能之二是相差觀察，其基本原理是將樣本不同部分的光程差轉變?yōu)檎穹?，經過帶有相位片的相差物鏡和帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡實現(xiàn)觀測，主要適用于活細胞或不染色的組織切片觀察,在實驗教學過程中，除了正確引導醫(yī)學研究生遵守相差觀察的基本操作方法，同時更為重要的是引導他們對使用相差觀察的標本認識和掌握。對他們來說，在日后的科學研究中，很為常用的是培養(yǎng)細胞的顯微觀察。首先，對于細胞器材的選擇，一般建議使用玻璃材質和塑料材質的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶。它們多為無色透明，可直接在醫(yī)用倒置顯微鏡上進行觀察，不用倒掉細胞液和經過其他處理。其次，在進行顯微觀察中，不要隨意打開器材的蓋子，以免污染細胞。對于操作人員來說，需佩戴手套、口罩和白大衣，不僅可以保護自身健康而且可以防止細胞污染。

3.熒光觀察的正確使用。醫(yī)用倒置顯微鏡的功能之三是熒光觀察，其基本原理是利用激發(fā)光激發(fā)樣本產生熒光，從而實現(xiàn)樣本的形狀與定位觀察，主要適用于熒光標記樣本的觀察。熒光觀察是醫(yī)用倒置顯微鏡的重要功能，其配件昂貴且使用特殊。要想醫(yī)學研究生正確地掌握熒光觀察的操作使用規(guī)范，教師除了教會他們掌握基本的操作方法，同時更為重要的是教會他們掌握它的特殊性。首先，在標本制作中，載玻片和蓋玻片應表面光潔且厚度適宜（載玻片在0.8mm~1.2mm之間，蓋玻片在0.17mm左右）；標本應厚度適宜，同時避免細胞重疊或雜質掩蓋；封裱劑應使用甘油和碳酸鹽緩沖液（0.5mol/L PH9.0～9.5）的等量混合液。其次，在熒光觀察前，應關閉房間內的電燈和醫(yī)用倒置顯微鏡的白光，確保處于暗室環(huán)境。在熒光觀察中，應嚴格控制觀察時間，一般以1~2小時/次為宜，否則熒光會出現(xiàn)衰減和消失的現(xiàn)象；調整光源時應佩戴防護眼鏡，避免紫外線對眼鏡的傷害。

4.圖像拍攝的正確使用。在科學研究中，不僅要求醫(yī)用倒置顯微鏡可以實現(xiàn)多種觀察，而且要求醫(yī)用倒置顯微鏡可以實現(xiàn)圖像拍攝。醫(yī)用倒置顯微鏡系統(tǒng)通過光電轉換將光學顯微鏡與計算機結合在一起，不僅可以在目鏡上進行顯微觀察，而且可以在計算機上進行實時動態(tài)圖像的觀察、編輯和保存。