在檢驗科的日常工作中，醫用顯微鏡是揭示微觀世界奧秘的關鍵工具。然而，并非所有樣品都能直接置于顯微鏡下觀察。本文將從樣品特性、操作規范及設備限制三個維度，詳細探討哪些樣品不宜或無法通過常規醫用顯微鏡進行觀察，幫助檢驗人員規避風險，確保檢測工作的準確性和安全性。

一、光學原理限制：透光性是核心門檻

顯微鏡成像依賴于光學原理，要求被觀察物體B須允許可見光穿透。不透明或厚度過大的樣品會直接導致無法成像。例如：

紙質材料：如普通紙片、濾紙等，因其纖維結構致密且厚度通常超過顯微鏡要求的薄層標準（一般需≤25μm），光線無法穿透，視野中會呈現一片漆黑。

未處理的金屬樣本：直接觀察金屬塊或粉末時，光線反射和散射嚴重，難以獲取清晰圖像。需通過打磨至10-15μm厚度并配合特殊染色（如硝酸酒精腐蝕）才能觀察。

高密度礦物樣本：如未切片的高嶺土原礦，因顆粒密集且透光性差，易導致誤判顆粒形貌，需通過制樣處理（如樹脂包埋、薄片切割）方可觀察。

二、樣本制備禁忌：操作不當引發誤判

樣本制備是顯微鏡觀察的關鍵前置步驟，以下操作會直接影響觀察結果甚至損壞設備：

未清潔樣本直接觀察
攜帶指紋、油污或污染物的樣本（如細菌培養物未擦拭）會導致圖像模糊，甚至因污染物遮擋引發誤診。規范操作要求用無水乙醇擦拭樣本表面，并通過低倍物鏡檢查潔凈度。

錯誤染色或步驟混亂
生物樣本使用金屬染色劑、未按標準流程進行蘇木精-伊紅（HE）染色，或金屬樣本未進行腐蝕處理，均會導致特征結構無法顯現。例如，某藥企因染色步驟錯誤，導致細胞核分裂相計數偏差達30%。

蓋玻片使用不當
未加蓋玻片或蓋玻片不平整（如用手指直接按壓），可能導致液態樣本（如細菌培養物）污染鏡頭。規范要求加蓋玻片后用吸水紙吸干多余液體，確保平整度＜0.01mm。

高倍物鏡誤操作
100×油鏡未滴加香柏油直接觀察，會導致分辨率下降50%以上；油鏡使用后未立即清潔，可能腐蝕物鏡。此外，高倍物鏡調焦時若力度過大（＞5N），易導致物鏡撞擊蓋玻片，造成設備損壞。

三、設備功能限制：特殊場景需專用設備

常規醫用顯微鏡的設計以滿足基礎檢驗需求為主，以下場景需依賴專用設備或附加組件：

活體細胞動態觀察
普通顯微鏡無法捕捉快速變化的細胞活動（如細胞分裂、吞噬過程）。需使用具備時間序列拍攝功能的活細胞成像系統，或結合熒光標記技術（如FDA染色）通過共聚焦顯微鏡實現三維重構。

超微結構解析
細菌、病毒等納米級微生物的精細結構（如鞭毛、衣殼）需通過透射電子顯微鏡（TEM）觀察，普通光學顯微鏡分辨率（約200nm）無法滿足需求。

特殊環境樣本
深部組織樣本（如顱內手術區域）需使用具備長工作距離（＞275mm）的手術顯微鏡；低溫或潮濕環境下的樣本需配合冷光源及防潮裝置，避免組織灼傷或鏡頭結霧。

四、安全與規范：不可忽視的操作紅線

禁止強行操作卡死部件
調焦旋鈕卡死時若強行轉動，易導致齒輪損壞或鏡頭脫落。某第三方檢測機構因此停機維修3周，規范要求遇阻力立即停止并檢查樣本。

禁止非專業人員拆卸設備
擅自拆卸物鏡、轉換器等精密部件可能導致光軸偏移，修復費用高昂。故障時應聯系專業維修人員，并定期進行預防性維護（如每半年校準光路）。

禁止忽視環境控制
顯微鏡存放在濕度＞85%或溫度＞40℃的環境中，易導致鏡片生霉或開膠。規范要求存放環境濕度控制在45-65%，溫度0-40℃，并放置硅膠干燥劑。

顯微鏡的觀察禁區既受限于光學原理，也與樣本制備、設備功能及操作規范密切相關。檢驗科人員需嚴格遵循以下原則：

樣本處理前移：確保樣本薄而透明，避免直接觀察未處理材料。

設備功能匹配：根據觀察需求選擇合適物鏡及附加組件（如熒光模塊）。

定期維護校準：每200小時清潔物鏡，每500小時進行光路校準，延長設備壽命。

通過規避上述禁區，可顯著提升顯微鏡的使用效率與成像質量，為臨床診斷提供可靠依據。